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    研究方案

生物学家Wilson预言:“一切生命的关键问题都要到细胞中去找。”。细胞是生物体生长、发育和繁殖的基础。金开瑞组建了专门的细胞研究团队,建立了强大的细胞研究平台,主要包括干细胞研究、CRISPR/Cas9系统基因编辑、细胞功能分析,可为您提供全方位的从方案设计到细胞分离分析、功能研究与CRISPR/Cas9改造等一站式服务。

CRISPR/Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)系统是继ZNF和TALENS技术之后的第三代基因编辑技术,被广泛应用于细胞水平和个体水平基因编辑细胞系和模式动物的建立。CRISPR/Cas9系统利用sgRNA/Cas9复合体识别并在DNA特异位点造成双链断裂,利用细胞自身修复机制或者与外源DNA同源重组实现基因敲、敲入和序列突变。利用CRISPR/Cas9技术使动物基因组发生可遗传变异,现已广泛用于基因编辑动物建立。将体外转录的sgRNA和Cas9 mRNA或者体外翻译的Cas9蛋白对小鼠/大鼠受精卵单细胞进行胞质或者原核显微注射后,得到基因敲除、敲入或者定点突变的编辑鼠。

服务内容

基因敲除细胞系建立;
基因敲入细胞系建立;
基因定点突变细胞系建立。

客户提供

目的基因序列信息(Gen Bank Accession number、Gene ID、关键词);
细胞类型及名称(也可选择由金开瑞代购),细胞培养条件。

最终交付

sgRNA序列;
基因敲除/敲入/突变单克隆细胞系;
sgRNA-Cas9基因敲除/敲入/突变质粒鉴定测序结果;
结题报告(包括实验步骤、测序结果及相关原始图片)。

案例展示

Cas9技术敲除细胞系构建案例:

Step 1: sgRNA设计

Step 2: 细胞抗药性筛选预实验(不加puro和添加1ug/ml puro)

Step 3:转染或感染效率测试:明场和绿色荧光

Step 4: 药物筛选、单克隆培养及单克隆细胞系靶点检测

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